1.項(xiàng)目背景
1.1臨床介紹-摘自《絕經(jīng)后卵巢腫物診治的中國專家共識(shí)（2021年版）》
1.1.1背景簡介
人附睪蛋白4（HE4）是一種由乳清酸性蛋白基因家族編碼的分泌型糖蛋白，最初在人附睪遠(yuǎn)端上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，正常組織中表達(dá)水平極低，但在卵巢癌等惡性腫瘤中顯著高表達(dá)，因此被廣泛應(yīng)用于卵巢癌的早期篩查、診斷和病情監(jiān)測(cè)。
1.1.2臨床意義
絕經(jīng)后卵巢腫物的診斷
血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)推薦及共識(shí)：CA125可作為絕經(jīng)后卵巢腫物的初選血清腫瘤標(biāo)志物，若與人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）聯(lián)合檢測(cè)，特異度升高；其他腫瘤標(biāo)志物如CA19-9、甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、CA724、乳酸脫氫酶（LDH）、β-hCG等可以協(xié)助診斷卵巢惡性腫瘤，但不推薦多種腫瘤標(biāo)志物串聯(lián)檢測(cè)用于最初評(píng)估（2A類推薦）。
惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)（RMI）和卵巢惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)模型（ROMA）
推薦及共識(shí)：RMI評(píng)分系統(tǒng)可以協(xié)助判斷卵巢惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，絕經(jīng)后RMI≥200者需進(jìn)一步行腹盆腔CT評(píng)估。ROMA風(fēng)險(xiǎn)分層有利于卵巢腫物分層管理（2A類推薦）。ROMA則是將CA125、HE4水平以及絕經(jīng)狀態(tài)相結(jié)合，用于預(yù)測(cè)卵巢上皮性癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。ROMA預(yù)測(cè)卵巢癌具有較高的敏感度，可用于絕經(jīng)后卵巢腫物的風(fēng)險(xiǎn)分層。如排除交界性卵巢腫瘤和非上皮性惡性腫瘤，RMI和ROMA預(yù)測(cè)絕經(jīng)后女性附件腫物特異度相似。
2.性能表現(xiàn)
針對(duì)HE4的檢測(cè)，西寶生物推出2株HE4抗體及1款HE4抗原。
具體性能如下（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行更為詳細(xì)的驗(yàn)證）。
2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
組合1：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記吖啶酯；
線性范圍：15pmol/L-1500pmol/L；最低檢出限：15pmol/L；HOOK：40000pmol/L。
2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
組合2：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記堿性磷酸酶；
線性范圍：15pmol/L-1500pmol/L；最低檢出限：15pmol/L；HOOK：40000pmol/L。
2.3熒光免疫層析平臺(tái)
組合3：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）標(biāo)記熒光微球+人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）劃膜；
線性范圍：15pmol/L-1500pmol/L；最低檢出限：15pmol/L；HOOK：40000pmol/L。
2.4各組分穩(wěn)定性評(píng)估
2.4.1采用HE4磁珠稀釋液（化學(xué)發(fā)光）將磁珠包被的HE4抗體濃縮液配制成工作液進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
2.4.2采用HE4吖啶酯稀釋液（化學(xué)發(fā)光）將吖啶酯標(biāo)記的HE4抗體濃縮液配制成工作液進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
2.4.3采用HE4堿性磷酸酶稀釋液（化學(xué)發(fā)光）將堿性磷酸酶標(biāo)記的HE4抗體濃縮液配制成工作液進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
如表1所示：
a.磁珠包被HE4抗體工作液單獨(dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)，表明磁珠包被HE4抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
b.吖啶酯標(biāo)記HE4抗體工作液單獨(dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±15%以內(nèi)，表明吖啶酯標(biāo)記HE4抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
c.堿性磷酸酶標(biāo)記HE4抗體工作液單獨(dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±15%以內(nèi)，表明堿性磷酸酶標(biāo)記HE4抗體工作液熱穩(wěn)定性良好。
表1 HE4各組分工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號(hào) | HE4抗原稀釋濃度（pmol/L） | 磁珠-包被HE4抗體工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 吖啶酯標(biāo)記HE4抗體工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 堿性磷酸酶標(biāo)記HE4抗體工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 |
S0 | 0 | -3.3% | 3.5% | -4.5% |
S1 | 15 | 8.7% | 9.9% | -10.1% |
S2 | 50 | 6.3% | 11.8% | -12.5% |
S3 | 100 | 4.5% | 12.7% | -13.2% |
S4 | 500 | 4.9% | 10.1% | -11.4% |
S5 | 1500 | -0.9% | 7.3% | -10.0% |
平均變化（不含S0） | 4.7% | 10.4% | -11.4% | |
3.臨床相關(guān)性
3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)HE4抗體配對(duì)組合1與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的低值（≤200pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性較好；與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的高值（＜1500pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性良好。
3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)HE4抗體配對(duì)組合2與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的低值（≤200pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性較好；與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的高值（＜1500pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性良好。
3.3熒光免疫層析平臺(tái)：
西寶生物熒光免疫層析HE4抗體配對(duì)組合3與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的低值（≤200pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性較好；與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的高值（＜1500pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性良好。
4.測(cè)試方案
4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
HE4抗體配對(duì)組合1
待測(cè)抗原:重組人附睪蛋白4(HE4）抗原（貨號(hào)：EKM3019B）；
樣本:樣品加樣量10ul；
試劑1：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul 試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
HE4抗體配對(duì)組合2：
待測(cè)抗原:重組人附睪蛋白4(HE4）抗原（貨號(hào)：EKM3019B）；
樣本:樣品加樣量10ul；
試劑1：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
4.3熒光免疫層析平臺(tái)
HE4抗體配對(duì)組合2：
待測(cè)抗原:重組人附睪蛋白4(HE4）抗原（貨號(hào)：EKM3019B）；
反應(yīng)條件：10ul樣品+100ul 稀釋液混勻，上樣，反應(yīng)時(shí)間（10min-15min）；
測(cè)試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 推薦配對(duì) |
人附睪蛋白4(HE4)單抗 | EKY0024I | HE4配對(duì)： HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合1） HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記堿性磷酸酶（貨號(hào)：DCE0108L）（發(fā)光配對(duì)組合2） HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024I）標(biāo)記熒光微球+HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024J）劃膜（熒光配對(duì)組合3） |
人附睪蛋白4(HE4)單抗 | EKY0024J | |
重組人附睪蛋白4(HE4）抗原 | EKM3019B | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠濃縮液 | DKY1382A | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）標(biāo)記熒光微球濃縮液 | DKY1382B | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）吖啶酯濃縮液 | DKY1382C | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1382D | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
APS-5 發(fā)光底物液（即用型） | ECD0532M | |
羧基磁性微球，1um | DEG0852A | |
時(shí)間分辨熒光微球，羧基（300nm） | AEG0789C |
1.項(xiàng)目背景
1.1臨床介紹-摘自《絕經(jīng)后卵巢腫物診治的中國專家共識(shí)（2021年版）》
1.1.1背景簡介
人附睪蛋白4（HE4）是一種由乳清酸性蛋白基因家族編碼的分泌型糖蛋白，最初在人附睪遠(yuǎn)端上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，正常組織中表達(dá)水平極低，但在卵巢癌等惡性腫瘤中顯著高表達(dá)，因此被廣泛應(yīng)用于卵巢癌的早期篩查、診斷和病情監(jiān)測(cè)。
1.1.2臨床意義
絕經(jīng)后卵巢腫物的診斷
血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)推薦及共識(shí)：CA125可作為絕經(jīng)后卵巢腫物的初選血清腫瘤標(biāo)志物，若與人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）聯(lián)合檢測(cè)，特異度升高；其他腫瘤標(biāo)志物如CA19-9、甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、CA724、乳酸脫氫酶（LDH）、β-hCG等可以協(xié)助診斷卵巢惡性腫瘤，但不推薦多種腫瘤標(biāo)志物串聯(lián)檢測(cè)用于最初評(píng)估（2A類推薦）。
惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)（RMI）和卵巢惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)模型（ROMA）
推薦及共識(shí)：RMI評(píng)分系統(tǒng)可以協(xié)助判斷卵巢惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，絕經(jīng)后RMI≥200者需進(jìn)一步行腹盆腔CT評(píng)估。ROMA風(fēng)險(xiǎn)分層有利于卵巢腫物分層管理（2A類推薦）。ROMA則是將CA125、HE4水平以及絕經(jīng)狀態(tài)相結(jié)合，用于預(yù)測(cè)卵巢上皮性癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。ROMA預(yù)測(cè)卵巢癌具有較高的敏感度，可用于絕經(jīng)后卵巢腫物的風(fēng)險(xiǎn)分層。如排除交界性卵巢腫瘤和非上皮性惡性腫瘤，RMI和ROMA預(yù)測(cè)絕經(jīng)后女性附件腫物特異度相似。
2.性能表現(xiàn)
針對(duì)HE4的檢測(cè)，西寶生物推出2株HE4抗體及1款HE4抗原。
具體性能如下（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行更為詳細(xì)的驗(yàn)證）。
2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
組合1：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記吖啶酯；
線性范圍：15pmol/L-1500pmol/L；最低檢出限：15pmol/L；HOOK：40000pmol/L。
2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
組合2：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記堿性磷酸酶；
線性范圍：15pmol/L-1500pmol/L；最低檢出限：15pmol/L；HOOK：40000pmol/L。
2.3熒光免疫層析平臺(tái)
組合3：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）標(biāo)記熒光微球+人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）劃膜；
線性范圍：15pmol/L-1500pmol/L；最低檢出限：15pmol/L；HOOK：40000pmol/L。
2.4各組分穩(wěn)定性評(píng)估
2.4.1采用HE4磁珠稀釋液（化學(xué)發(fā)光）將磁珠包被的HE4抗體濃縮液配制成工作液進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
2.4.2采用HE4吖啶酯稀釋液（化學(xué)發(fā)光）將吖啶酯標(biāo)記的HE4抗體濃縮液配制成工作液進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
2.4.3采用HE4堿性磷酸酶稀釋液（化學(xué)發(fā)光）將堿性磷酸酶標(biāo)記的HE4抗體濃縮液配制成工作液進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
如表1所示：
a.磁珠包被HE4抗體工作液單獨(dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)，表明磁珠包被HE4抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
b.吖啶酯標(biāo)記HE4抗體工作液單獨(dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±15%以內(nèi)，表明吖啶酯標(biāo)記HE4抗體工作液熱穩(wěn)定性良好；
c.堿性磷酸酶標(biāo)記HE4抗體工作液單獨(dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±15%以內(nèi)，表明堿性磷酸酶標(biāo)記HE4抗體工作液熱穩(wěn)定性良好。
表1 HE4各組分工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號(hào) | HE4抗原稀釋濃度（pmol/L） | 磁珠-包被HE4抗體工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 吖啶酯標(biāo)記HE4抗體工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 | 堿性磷酸酶標(biāo)記HE4抗體工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 |
S0 | 0 | -3.3% | 3.5% | -4.5% |
S1 | 15 | 8.7% | 9.9% | -10.1% |
S2 | 50 | 6.3% | 11.8% | -12.5% |
S3 | 100 | 4.5% | 12.7% | -13.2% |
S4 | 500 | 4.9% | 10.1% | -11.4% |
S5 | 1500 | -0.9% | 7.3% | -10.0% |
平均變化（不含S0） | 4.7% | 10.4% | -11.4% | |
3.臨床相關(guān)性
3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)HE4抗體配對(duì)組合1與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的低值（≤200pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性較好；與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的高值（＜1500pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性良好。
3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)HE4抗體配對(duì)組合2與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的低值（≤200pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性較好；與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的高值（＜1500pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性良好。
3.3熒光免疫層析平臺(tái)：
西寶生物熒光免疫層析HE4抗體配對(duì)組合3與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的低值（≤200pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性較好；與羅氏診斷的HE4試劑（電化學(xué)發(fā)光法）賦值的高值（＜1500pmol/L）臨床樣本相關(guān)性R2＞0.95，相關(guān)性良好。
4.測(cè)試方案
4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
HE4抗體配對(duì)組合1
待測(cè)抗原:重組人附睪蛋白4(HE4）抗原（貨號(hào)：EKM3019B）；
樣本:樣品加樣量10ul；
試劑1：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul 試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
HE4抗體配對(duì)組合2：
待測(cè)抗原:重組人附睪蛋白4(HE4）抗原（貨號(hào)：EKM3019B）；
樣本:樣品加樣量10ul；
試劑1：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
4.3熒光免疫層析平臺(tái)
HE4抗體配對(duì)組合2：
待測(cè)抗原:重組人附睪蛋白4(HE4）抗原（貨號(hào)：EKM3019B）；
反應(yīng)條件：10ul樣品+100ul 稀釋液混勻，上樣，反應(yīng)時(shí)間（10min-15min）；
測(cè)試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 推薦配對(duì) |
人附睪蛋白4(HE4)單抗 | EKY0024I | HE4配對(duì)： HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合1） HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠+HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記堿性磷酸酶（貨號(hào)：DCE0108L）（發(fā)光配對(duì)組合2） HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024I）標(biāo)記熒光微球+HE4單抗（貨號(hào)：EKY0024J）劃膜（熒光配對(duì)組合3） |
人附睪蛋白4(HE4)單抗 | EKY0024J | |
重組人附睪蛋白4(HE4）抗原 | EKM3019B | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）包被羧基磁珠濃縮液 | DKY1382A | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024I）標(biāo)記熒光微球濃縮液 | DKY1382B | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）吖啶酯濃縮液 | DKY1382C | |
人附睪蛋白4(HE4)單抗（貨號(hào)：EKY0024J）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1382D | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
APS-5 發(fā)光底物液（即用型） | ECD0532M | |
羧基磁性微球，1um | DEG0852A | |
時(shí)間分辨熒光微球，羧基（300nm） | AEG0789C |
